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PCR原理及反應步驟
2022-07-21 PCR的原理：多聚酶鏈式反應(polymerasechainreaction)簡稱PCR技術，是近30多年發展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術，可在數小時之內對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應完成DNA擴增的過程。PCR技術的特異性取決于引物和模板DNA結合的特異性。PCR反應分為三步：1)變性：通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，...
影響重組腸激酶活性的因素有哪些
2022-07-20 腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動物十二指腸內的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達的融合蛋白（識別位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發。牛腸激酶由一條結構亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構成，二者以二硫鍵結合。據報道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時對基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強。天然腸激酶來源有限，且從動物組織提...
一圖讀懂細胞轉染那些事-part1
2022-06-30 簡析各類細胞轉染方法細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。定義隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。下文中將從多個維度，介紹細胞轉染的各類小知識。一、瞬時轉染與穩定轉染哺乳動物細胞表達系統能促使在其內表達的蛋?正確折疊并進行復雜修飾，表達的蛋?更接近真實自然狀態，便于模擬真實細胞內環境，進行蛋白功能研究。把目的基因轉入哺乳動物細胞，表達?產蛋?通常有兩種?式：瞬時轉染與穩定轉染（構建穩定細胞系），如圖...
RNA提取方法總結
2022-06-22 這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質在上清中。使用這種方法，不但能得到高質量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細胞質和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細...
如何選擇核酸染料
2022-05-27 科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎？帶您認識幾款優秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發的兩款核酸染料。據不*統計，有強烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優勢占據核酸染料使用量多，在眾多的EB替代染料中，名氣最大的要數Life公司的SYBR系列、美國Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是國內不成熟的仿品，安全性毫無保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...
細胞增殖及細胞活力檢測方法
2022-05-25 一、細胞增殖與細胞活性細胞增殖是活細胞的重要?理功能之?，細胞增殖與細胞活性檢測所用的方法相近，但實驗目的不同。細胞增殖是通過細胞增殖的物質基礎判斷細胞的數量變化，例如細胞計數法，反應的就是細胞真實的數量。而細胞活性檢測，則是通過檢測細胞受到藥物或其他措施處理后，標志物產量或濃度的變化，進而判斷藥物或處理措施的作用，細胞活性檢測所得結論，往往反映了實驗設計的目的。細胞增殖檢測，因檢測標志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP濃度...
蛋白保存方法，你知道多少
2022-05-24 生物大分子的貯藏保存可分為干態和液態貯藏兩種。蛋白質失活受多種理化因素的影響，主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態、微生物活動、保存時間和容器等。這些因素可單獨起作用，但更多情況是協同作用。總的來說，蛋白質的保存主要考慮其構型穩定、活性中心的保護、避免輔助因子喪失等，以防止其變性、解聚或降解。由于溫度和水分對蛋白質的穩定性影響很大，故蛋白質最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。1.液態保存(1).在低溫下保存蛋白質對熱敏感，溫度越高，穩定性越差。因此，低溫保存蛋...
牛血清白蛋白BSA在生化實驗中有廣泛的應用
2022-04-26 牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）是牛血清中的一種球蛋白，又稱第五組分（需要注意的是，第五組分并不是BSA的一種組份，而是EdwinJ.Cohn教授早期從血液中通過特定的分離技術得到5種組份，其中第五種就是白蛋白），CAS號為9048-46-8，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用，無免疫球蛋白IgG牛血清白蛋白產品血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用...

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