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胎牛血清使用中的常見問題解答
2022-09-19 1、如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。2、血清中包含絮狀...
提高細胞轉染效率的方法有哪些？
2022-09-15 轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學介導方法：如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法：有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化...
介紹細胞凍存的主要步驟
2022-09-13 細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透...
原代細胞轉染的實驗操作要注意的事項
2022-09-06 原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫藥產業如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉...
選擇真核細胞轉染試劑要考慮哪些因素
2022-08-30 轉染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導入細胞的過程。采用各種化學、生物學或物理方法導入外源性核酸會改變細胞的特性,從而實現細胞基因功能和蛋白質表達研究。轉染后,導入的核酸可以瞬時性地存在于細胞內,只表達一段時間且不會復制,也可以穩定地整合至受體基因組內,隨著宿主基因組的復制而復制,各種基因輸送系統采用的術語與該領域的技術進展步調一致,并進一步區分不同的方法和細胞類型。轉染技術作為一種分析工具，可將外源基因導入真核細胞，有助于機體表征遺傳、蛋白質合成、細...
影響細胞轉染效率的因素有哪些？
2022-08-19 細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。影響細胞轉染效率的因素有哪些？1.轉染試劑的選擇不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選...
核酸純化的方法及原理
2022-08-19 核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎，核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的最重要因素，也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提...
化學發光免疫分析包含免疫分析系統和化學發光分析系統
2022-07-22 在常溫下由化學反應產生的光，產生電子能級處于激發態的物質，后者通過躍遷釋放能量產生光子，從而導至的發光現象。化學發光是一個多步驟的過程。學發光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學發光技術與高特異性的免疫反應結合起來建立的微量測定技術，因此該技術靈敏度高、線性范圍寬、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...

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