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慢病毒的感染效率受哪些因素影響?

更新時間:2023-01-06點擊次數:1871
   慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,直徑為80-120nm,呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型),再往里依次為基質蛋白和衣殼,最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現典型的臨床癥狀之前,大多經歷長達數年的潛伏期,之后緩慢發病,因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒包裝系統一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所有輔助蛋白。
  慢病毒感染效率受到多種因素的影響,首先,考慮病毒包裝制備是否存在問題,比如外源基因是否正確,病毒滴度是否合格等。其次,考慮病毒運輸和保存方式是否得當,解凍病毒一定要在冰上進行,避免反復凍融,否則會影響病毒滴度;-80℃保存半年以上需要重新測定滴度。細胞狀態對于慢病毒轉導效率也具有很大的影響,良好的生長狀態是達到高感染效率的保證,一般選擇細胞形態較好、輪廓清晰、處于對數生長期的細胞進行感染可提高感染效率。臨床慢病毒轉導用途關于慢病毒轉導的臨床實驗。
  基因治療的臨床效果取決于細胞的高水平轉導,雖可通過二次轉導或提高感染復數(multiplicityofinfection,MOI)增加轉導率,但延長體外培養時間可誘導干細胞進入細胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復數會提高插入突變風險和增加生產成本。因此,在不斷改造慢病毒以增加安全性的同時,提高病毒轉導效率是亟待解決的難題。慢病毒轉導過程的限制因素包括病毒黏附、入胞、細胞運輸及固有免疫作用。通過引入異源病毒包膜構建新的偽型載體和/或在轉導過程中添加病毒轉導增強劑(transductionenhancers,TEs),可有效克服LVVs轉導的障礙,增加轉導細胞比例,從而達到臨床需要的轉導水平。

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