EvaGreen PCR核酸染料（20X水溶液） 使用說明書

EvaGreen PCR核酸染料(20X水溶液)

EvaGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結合熒光染料,是一種新一代用于實時定量PCR（qPCR）的DNA結合染料。該染料結構上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體，在沒有DNA存在時，該結構呈無熒光環狀結構，一旦有DNA出現，則恢復隨機形態并與DNA結合發出強烈的綠色熒光。

與市場上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，EvaGreen具有如下突出優點：1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的PCR擴增信號。2）PCR抑制性小，非常適合多重PCR及HRM分析。過量染料形成二聚體，而不游離，使得EvaGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I。因此，使用EvaGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。同時，EveGreen在實驗中可以使用較高的濃度，從而獲得遠強于SYBR Green I擴增信號。EvaGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析(HRM)。3）高穩定性：在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。4）安全性好：細胞膜穿透性測試表明，EvaGreen幾乎不能穿透細胞膜，安全性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時不許改變光譜元件設置，也無需改變操作步驟，qPCR完成后，無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統下觀察分析。

此外，EvaGreen是目前僅有的可以用于微滴式數字PCR系統的染料，在微流控PCR，恒溫擴增，毛細管電泳，DNA定量以及細胞活力鑒定等領域也具有的表現。本品以20×EvaGreen水溶液形式提供。

運輸與保存方法

冰袋運輸。4 ºC干燥避光保存，保質期12個月。

注意事項

1）做qPCR時注意設置陽性和陰性對照。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

光學性質

激發波長= 500 nm

發射波長= 530nm

 實驗方法

PCR反應的配制（50uL）

注意事項

1)  請根據不同的儀器類型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據所使用的Taq酶的不同進行適當優化；

2）根據實驗用量于冰上向無菌離心管中依次加入水，Taq polymerase buffer, dNTPs, MgCl2, EveGreen, Taq polymerase, and primers等配制qPCR反應體系（1×Master mix）；

3）將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應)；

4）按照儀器類型選擇合適的擴增程序。