線粒體染色試劑盒的分離原理

　　核線粒體的分離原理:

　　1.通過機械方法破裂細胞。

　　2.通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞。

　　3.通過高速差速離心獲得線粒體。

　　使用注意事項：

　　1.全程低溫操作，將樣品管放在冰水浴而不是碎冰中。

　　2.快速、微量制備比大規模制備操作更方便快捷，因而更容易獲得完整的線粒體。

　　3.在不破壞亞細胞器的情況下、破碎細胞是制備線粒體的關鍵環節。與組織塊相比，培養細胞特別是貼壁培養細胞在用玻璃均漿時較難破壁，因而要選小容量、玻璃均漿器，間隙嚴密的研杵上下研磨培養細胞。在相差顯微鏡下檢查未裂解細胞應在50%左右。研磨過度將破壞線粒體。研磨不足會降低得率。

　　4.離心力g計算正確的離心速度，不同離心機可依據此計算離心速度。

　　5.進行WesternBlot和2D-膠電泳，可直接加入樣品緩沖液裂解線粒體。

　　線粒體染色試劑盒可以標記活細胞中的線粒體，使之帶紅色熒光(Ex/Em=640/659nm)(Cy5filter)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，屬線粒體選擇性染料，該染料能輕易進入活細胞內，通過線粒體膜電位變化滲透進入線粒體，并在線粒體中富集。線粒體染色試劑盒提供了標記線粒體的全套試劑，能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。