Smart Cell 線粒體染色試劑盒Orange使用說明書

SmartCell 線粒體染色試劑盒Orange(同Mitotracker Orang)

產品描述

線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數真核細胞中的兩層膜結構的細胞器，是細胞中的“能量工廠”(cellular power plants)",生產了細胞所需的大部分ATP，除了為細胞提供能量外，還涉及諸如細胞分化、細胞信息傳遞和細胞凋亡等過程，并擁有調控細胞生長和細胞周期的能力。已有文獻報道，線粒體還與線粒體失調癥、心臟功能障礙、衰老等人類疾病有關。盡管大部分細胞遺傳物質DNA在細胞核內，但線粒體擁有獨立的基因組，呈現母性遺傳。基于以上特點，線粒體是生物、生命科技領域的研究熱點。

Smart Cell染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發的一類熒光成像工具，試劑盒設計嚴謹，需人為手動操作的步驟很少。可用來標記細胞器、亞細胞等結構，例如細胞膜、線粒體、線粒體和細胞核等。

Smart Cell線粒體染色試劑盒可以標記活細胞中的線粒體，使之帶橙色熒光(Ex/Em =545/575 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，屬線粒體選擇性染料，該染料能輕易進入活細胞內，通過線粒體膜電位變化滲透進入線粒體，并在線粒體中富集。Smart Cell線粒體染色試劑盒提供了標記線粒體的全套試劑，能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

使用方法 

 1. 準備線粒體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預熱MitoView Orange染料(Component A)。 

1.2 取20µL預熱好的MitoView Orange染料(Component A)，用10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進行稀釋。 

注意：1) 20μL MitoView Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗，剩余的MitoView Orange染料(Component A) 可以根據需要分裝避光保存于-20℃，避免反復凍融。2)*染料濃度根據具體應用會有不同，染色條件根據細胞類型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進行調整優化。

2. 細胞染色 

2.1 貼壁細胞：在96孔板（100μL）或培養皿內培養細胞，當細胞達到70-80%融合度，在96孔板或培養皿內添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養細胞30分鐘-2小時。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養基按1:1)替換色染液。同TRITC設置在顯微鏡下進行熒光觀察。

注意：如果細胞沒有充分染色，可以適當增加染料濃度或增加染色時間進行改善

2.2 懸浮細胞: 在1000 rpm 條件下離心細胞培養液5分鐘，棄去上清，用預熱好的細胞培養液溫和的重懸細胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養細胞30分鐘-2小時。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養基按1:1)替換色染液。同TRITC設置在顯微鏡下進行熒光觀察。

圖1：HeLa 細胞用SmartCell線粒體染色試劑盒Orange染色后進行成像分析

（所用96孔板為Costar black）