Smart Cell 溶酶體染色試劑盒Orange使用說明書

SmartCell溶酶體染色試劑盒*Orange*

產品描述

溶酶體是細胞內具有單層膜囊狀結構的細胞器，溶酶體被比喻為細胞內的“酶倉庫”或“消化系統”，溶酶體內含有許多種水解酶類，能夠將細胞吞噬進的食物或致病菌等大顆粒物質消化成生物大分子，殘渣通過外排作用排出細胞，分解很多種物質，也能在細胞分化過程中，將陷入溶酶體內的某些衰老細胞器和生物大分子消化。溶酶體膜內pH值約4.5-4.8，使得消化酶類可以在酸性條件下工作，溶酶體外的胞質內，pH值為7.2左右，溶酶體膜通過從胞質泵入H+維持溶酶體內外這種pH差異。

Smart Cell溶酶體染色試劑盒*Orange*可以標記活細胞中的溶酶體，使之帶橙色熒光(Ex/Em =542/556 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，屬趨溶酶體染料，染料滲透進入完整的活細胞中，有選擇性進入溶酶體，并因溶酶體膜內外的不同pH環境而被鎖定在溶酶體中。染料一旦進入溶酶體中，熒光顯著性增強并非常穩定。基于這一特點，本試劑盒可以用于酶標版、免疫組化和流式細胞技術等應用，用于多種不同類型的研究中，包括細胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細胞活性、細胞凋亡和細胞毒性的研究，適用于增殖型和非增殖型細胞，也可以用于懸浮和貼壁細胞。

Smart Cell溶酶體染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發的一類熒光成像工具，試劑盒設計嚴謹，需人為手動操作的步驟很少。可用來標記細胞器、亞細胞等結構，例如細胞膜、溶酶體、溶酶體和細胞核等。Smart Cell溶酶體染色試劑盒提供了標記溶酶體的全套試劑，針對每種細胞結構都能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

使用方法 

 1. 準備溶酶體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預熱LysoBrite Orange染料(Component A)。 

1.2 取20µL預熱好的LysoBrite Orange染料(Component A)，用10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進行稀釋。 

注意：1) 20μL LysoBrite Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗，剩余的LysoBrite Orange染料(Component A) 可以根據需要分裝避光保存于-20℃，避免反復凍融。2)*染料濃度根據具體應用會有不同，染色條件根據細胞類型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進行調整優化。

2. 細胞染色 

2.1 貼壁細胞：在96孔板（100μL）或培養皿內培養細胞，當細胞達到70-80%融合度，在96孔板或培養皿內添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養細胞30分鐘-2小時。用 TRITC濾光片在顯微鏡下進行熒光觀察。

注意：如果細胞沒有充分染色，可以適當增加染料濃度或增加染色時間進行改善

2.2 懸浮細胞: 在1000 rpm 條件下離心細胞培養液5分鐘，棄去上清，用預熱好的細胞培養液溫和的重懸細胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養細胞30分鐘-2小時。用 TRITC濾光片在顯微鏡下進行熒光觀察。

圖1：U2OS 細胞用SmartCell溶酶體染色試劑盒*Orange*染色后進行成像分析

                       （所用96孔板為Costar black）

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