2 x Taq PCR Master Mix 使用說明書

發(fā)布時間：2017/11/14

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2 x Taq PCR Master Mix

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	保存	價格(元)
2 x Taq PCR Master Mix	D1101L1146	1 mL	-20℃	200

產(chǎn)品簡介

2 × Taq PCR Master Mix是即用型的常規(guī)PCR預(yù)混合溶液，含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及優(yōu)化的緩沖體系，它以2×的濃度形式存在，反應(yīng)時只需加入所需引物和模板，用水稀釋即可立刻配制完P(guān)CR體系。本產(chǎn)品中含有PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可輕松克隆至T載體。

運輸與保存方法
冰袋運輸。收到產(chǎn)品后放到-20 ºC保存，有效期12月以上。

使用方法

1. 反應(yīng)體系配制（50μl）：

模板DNA	optional
引物1（10 μM）	2 μL
引物2（10 μM）	2 μL
2× PCR Master Mix (With Dye)	25μL
ddH2O	up to 50μL

注：針對不同模板的*反應(yīng)濃度有所不同，下表為50μl反應(yīng)體系推薦模板使用量，僅供參考。

人基因組DNA	0.1～1 μg
大腸桿菌基因組DNA	10～100 ng
λDNA	0.5～5 ng
質(zhì)粒DNA	0.1～10 ng

2. PCR循環(huán)反應(yīng)條件

94℃	5 min（預(yù)變性）
94℃	30 sec	35個循環(huán)
55℃*	30 sec
72℃	30 sec
72℃	7 min（*延伸）

注：退火溫度需要根據(jù)引物的Tm值調(diào)整，一般設(shè)置成低于引物Tm值1-2℃即可。

注意事項
1.由于Taq DNA Polymerase室溫下也有一定的反應(yīng)活性，PCR反應(yīng)體系配制需在冰上進行。體系混勻后快速置于PCR儀進行反應(yīng)。這樣可以減少反應(yīng)準備階段的非特異擴增，有助于得到更好的PCR結(jié)果。
2. 引物設(shè)計注意事項
2.1 引物3’端zui后一個堿基選擇C或G，端zui后8個堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯配；端盡量避免發(fā)卡結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)；
2.2 引物Tm值控制在55℃-65℃之間；
2.3 引物額外附加序列，即與模板非配對序列，不應(yīng)參與引物Tm值計算；
2.4 引物GC含量控制在40%-60%之間；
2.5 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

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