BCA蛋白定量試劑盒檢測方法及注意事項(xiàng)

　　BCA蛋白定量試劑盒檢測方法：
 

　　1. 試管檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20)
 

　　(1) 各取100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到反應(yīng)管中。
 

　　(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混勻。根據(jù)待測樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度。
 

　　標(biāo)準(zhǔn)孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室溫2h(檢測范圍：20-2000 μg/mL)
 

　　增強(qiáng)孵育方法：60℃ 孵育30 min(檢測范圍：5-250 μg/mL)
 

　　【注】：BCA 檢測蛋白濃度，延長孵育時(shí)間會加深顏色反應(yīng)。升高溫度會加快顯色反應(yīng)，但是溫度升高和時(shí)間延長會降低檢測下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長孵育時(shí)間。
 

　　(3) 冷卻到室溫。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測，設(shè)定波長為 562 nm，在10 min內(nèi)對所有樣品讀數(shù)?！咀ⅰ浚河捎贐CA 反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn)，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會繼續(xù)。但是，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)?，因此若?0 min 內(nèi)能對所有的樣本進(jìn)行 562 nm 吸光度的測試，不會導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤。
 

　　(4) 根據(jù)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù))，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
 

　　2. 微孔板檢測方法(樣品: BCA工作液=1:20)
 

　　(1) 各取10 μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到微孔板中?！咀ⅰ浚簶悠放c工作液比例為1:20，檢測范圍為125-2000 μg/mL。若樣品濃度非常低，可使用25μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測樣品進(jìn)行檢測(即1:8)，這時(shí)試劑盒的檢測范圍為 20-2000 μg/mL。
 

　　(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液，槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板，37℃ 孵育30 min。
 

　　(3) 冷卻到室溫，在酶標(biāo)儀上的562 nm 波長范圍處檢測吸光度。
 

　　(4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù))，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線( X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
 

　　BCA蛋白定量試劑盒注意事項(xiàng)：

 

　　本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
 

　　若測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)無梯度變化，表明存在BCA法檢測干擾物，詳細(xì)的BCA法干擾物質(zhì)兼容性表詳見官*。