BCA蛋白定量試劑盒檢測方法及注意事項

　　BCA蛋白定量試劑盒檢測方法：
 

　　1. 試管檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20)
 

　　(1) 各取100 μL 標準品和待測樣品加入到反應管中。
 

　　(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混勻。根據待測樣品的濃度范圍選擇孵育時間和溫度。
 

　　標準孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室溫2h(檢測范圍：20-2000 μg/mL)
 

　　增強孵育方法：60℃ 孵育30 min(檢測范圍：5-250 μg/mL)
 

　　【注】：BCA 檢測蛋白濃度，延長孵育時間會加深顏色反應。升高溫度會加快顯色反應，但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。
 

　　(3) 冷卻到室溫。在分光光度計上進行檢測，設定波長為 562 nm，在10 min內對所有樣品讀數。【注】：由于BCA 反應達不到真正的反應終點，即使溫度降低至室溫生色反應液會繼續。但是，由于室溫下生色比率相當低，因此若是10 min 內能對所有的樣本進行 562 nm 吸光度的測試，不會導致明顯錯誤。
 

　　(4) 根據BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD 值即最終的讀數)，繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
 

　　2. 微孔板檢測方法(樣品: BCA工作液=1:20)
 

　　(1) 各取10 μL標準品和待測樣品加入到微孔板中。【注】：樣品與工作液比例為1:20，檢測范圍為125-2000 μg/mL。若樣品濃度非常低，可使用25μL 標準品和待檢測樣品進行檢測(即1:8)，這時試劑盒的檢測范圍為 20-2000 μg/mL。
 

　　(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液，槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板，37℃ 孵育30 min。
 

　　(3) 冷卻到室溫，在酶標儀上的562 nm 波長范圍處檢測吸光度。
 

　　(4) 根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數)，繪制標準曲線( X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
 

　　BCA蛋白定量試劑盒注意事項：

 

　　本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
 

　　若測定標準曲線時無梯度變化，表明存在BCA法檢測干擾物，詳細的BCA法干擾物質兼容性表詳見官*。