轉染試劑原理及操作方法

　　轉染試劑是由它的體外轉染試劑加上一些專有的肽配制而成。與傳統的配方相比，這款運用了新的化學試劑，DNA濃縮組被顯著地釋放。主鏈上連上具有屏蔽效應的肽，用來防止被體內環境的干擾，獲得高的體內轉染效率。
 

　　轉染試劑指真核細胞由于外源DNA摻入而獲得新的遺傳標志的過程。哺乳動物的轉染技術在60年代末70年代初即已引入。DNA轉染技術的發展對現代分子生物學產生了巨大的影響。基因轉染技術不僅是研究轉基因和基因表達的重要工具，而且是目前基因治療的關鍵步驟。理想的基因轉染試劑應該具有如下特點：1.轉染；2.安全；3.低細胞毒性；4.方法簡單；5.省時、經濟。
 

　　轉染試劑工作原理：脂質體帶正電，可以靠靜電作用結合到DNA的磷酸骨架上以及帶負電的細胞膜表面。使用陽離子脂質體試劑，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物。
 

　　轉染試劑操作簡單、快速，為操作者節約大量操作時間。
 

　　1. 以24孔細胞板轉染實驗為例，推薦一次(即每孔)轉染實驗的低內毒素質粒DNA用量為2µg、轉染試劑用量為3~5µl(轉染試劑的zui適用量需要根據不同細胞和不同培養基來優化，但理論上不超出3~5µl范圍)。轉染實驗中使用無菌生理鹽水稀釋質粒和轉染試劑即可。
 

　　2. 為獲得zui高轉染效率并盡可能降低細胞毒性，建議轉染時細胞密度控制在50～80%范圍內，而且在不影響轉染效率的前提下，盡可能減少轉染試劑的用量。
 

　　3. 本品極大簡化了轉染步驟，轉染試劑和質粒混合后無需室溫靜置孵育，可直接加入含血清的細胞培養基中進行轉染，而且無需在轉染后補加血清或更換培養基。
 

　　4. 如果實驗目的在于篩選抗藥性穩定細胞系，可在細胞傳代后直接進行轉染試劑實驗，從而節省了18~24小時的轉染前細胞培養時間！