如何避免胎牛血清使用時出現(xiàn)黑點

　　在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜，影響后續(xù)實驗的結果，我們在實驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細胞，效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

　　為防止客戶由于操作方面而使黑點生成的辦法。對此一定要做好以下幾點。方可使細胞培養(yǎng)順利。

　　（1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

　　（2）培養(yǎng)基無需37℃水浴。

　　（3）培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。

　　（4）嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質，容器定期刷洗。

　　（5）掌握細胞傳代的時機，細胞切勿生長過老。

　　1、化凍將血清從-20度冰箱中取出，室溫（或浸于自來水中）化凍（約需要30分鐘至2小時，也可放于4度冰箱化凍過夜；化凍后若不馬上滅活，可以放入4度冰箱中暫時保存）

　　2、滅活

　　（1）放入室溫的水浴鍋內開始加熱（同時放入一個空的血清瓶，內裝100ml自來水，插入一根溫度計，溫度監(jiān)控以此為準）

　　（2）當溫度計顯示56度時，停止加熱，改為間斷加熱，維持56度（±0.5度）30分鐘（±3分鐘；若不小心使溫度上升超過56度，則：若仍未超過60度，且時間很短，比如不超過5分鐘，則仍可使用；若超過60度，或者時間較長，則棄去不用，或者嘗試用于一些普通細胞的培養(yǎng)）

　　（3）取出，自然冷卻至室溫（約需1-3小時），可分裝或-20度繼續(xù)凍存。

　　3、分裝

　　（1）轉入無菌間，在超凈臺內將血清分裝入10ml離心管中（注意預先要將血清輕輕搖動數(shù)周、混勻；用吸液管或吹大管吹出血清時要注意：不要吹出氣泡（血清很粘稠，很容易產(chǎn)生氣泡；如果產(chǎn)生氣泡，則在酒精燈火焰上過一下））

　　（2）放入-20度冰箱凍存

　　（3）全部操作約需要4-6小時