溶酶體染色試劑盒實驗前的準備工作

 

  溶酶體染色試劑盒是細胞控制其生長潛能的保障機制一般含義是復制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細胞經過有限次數的分裂后，停止分裂，此時細胞雖然是存活的，但是細胞形態和生理代謝活性發生明顯變化的現象。體外衰老細胞研究常用的生物學特征包括不可逆的生長停滯；）與衰老相關的β-半乳糖苷酶senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作為溶酶體內的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現活性。但是衰老細胞內其在pH 6.0的條件下表現活性，且隨著傳代次數的增加，細胞群體中表現衰老相關的β-半乳糖苷酶的細胞數目逐漸增加。

 

  溶酶體染色試劑盒注意事項，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作，本試劑盒固定液B存在一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意小心防護。染色液E剛剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正常現象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后用于染色實驗。X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細胞樣品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。細胞β-半乳糖苷酶活性強，孵育3 h即顯示陽性；細胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24 h。細胞染色zui長孵育時間為 24 h。細胞呈現藍色的部位即為衰老細胞特異性β-半乳糖苷酶活性部位。細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的pH值，不能用于細胞培養的CO2培養箱中進行染色反應。因為CO2培養箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。本試劑盒適合各種類型和規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35 mm 培養皿和各種孔數的細胞培養板，只需按照一定的比例調整工作液用量即可。